Подсчет уровня вирусной нагрузки при гепатите С

Вирусный гепатит С (ВГС) — это вирусная инфекция из группы гепатитов с парентеральным механизмом передачи, поражением печени и внепеченочными проявлениями. В основе серологической диагностики ВГС лежит принцип детекции специфических антител к возбудителю и определении РНК вируса с подсчетом копий.

Детекция специфических антител и РНК вируса используется для диагностики заболевания, а количественный анализ вирусной нагрузки применяется для назначения схемы противовирусной терапии и контроля ее эффективности у отдельно взятого пациента.

Принципы диагностики ВГС

Серологическая диагностика гепатита С основана на обнаружении в образцах плазмы крови человека уникальных маркеров вируса гепатита С: антител к антигенам ВГС, относящихся к иммуноглобулинам классов G и M (анти-ВГС-IgG и анти-ВГС-IgM), и нуклеиновой кислоты возбудителя (РНК ВГС).

Принцип метода основан на обнаружении в исследуемом материале специфичных фрагментов ДНК (РНК) различных биологических объектов, их избирательном синтезе и дальнейшей детекции продуктов реакции амплификации этих фрагментов.

Количественные модификации ПЦР дают представление о ВН, имеющей решающее значение для прогноза и контроля терапии вирусного гепатита С.

[youtube]tUPXWPrqFaw[/youtube]

Подсчет уровня вирусной нагрузки при вирусном гепатите С

Обычно РНК ВГС может определяться в крови уже в первую неделю после заражения, до появления анти-ВГС (анти-HCV), которые могут не выявляться в течение первых 8–12 недель. Оба маркера ВГС-инфекции могут обнаруживаться в крови в различных сочетаниях, что требует правильной клинической интерпретации.

Поэтому для формирования окончательного диагноза целесообразно, особенно при выявлении только одного из двух маркеров ВГС, проводить повторное тестирование образца крови на анти-ВГС и РНК ВГС.

В ходе исследования выполняется детекция и подсчет числа копий РНК ВГС методом ПЦР в реальном времени.

В клинической практике наиболее совершенным методом ПЦР-диагностики является REAL-TIME ПЦР, которая исключает загрязнение образцов и дает заключение о наличии и количестве РНК ВГС через две недели после предполагаемого инфицирования. Эта методика, кроме прочего, определяет генотип вируса с вирусной нагрузкой за одно исследование. Клиническая специфичность теста составляет 100%. Стандартный интервал значений теста от 15 до 100000000 МЕ/мл. Выявляются генотипы вируса 1-6 (1, 2, 3, 4, 5, 6). Порог положительного теста, когда может быть обнаружена РНК вируса, составляет 15 МЕ/мл. Основным преимуществом метода ПЦР является очень высокая чувствительность анализа – до 1 копии геномной ДНК возбудителя инфекции в исследуемой пробе в nested-модификации ПЦР.

ПЦР – современный, высокочувствительный метод. Но его достоинство – высокая чувствительность — является одновременно и его уязвимостью, т. е. приводит к ложным результатам даже при выполнении анализа высококвалифицированными специалистами в хорошо оснащенных лабораториях. Результаты исследований в разных лабораториях часто не совпадают, что указывает на необходимость стандартизации диагностических систем для ПЦР-диагностики и повышенного внимания к проведению данного вида исследований. Высокая стоимость, длительность анализа, сложность метода и несовпадение результатов, полученных в разных лабораториях, ограничивают использование ПЦР в широкой практике.

Результаты исследования выдаются на бланке с таблицей, в которой указан выявленный уровень РНК вируса (количество копий или концентрация в МЕ/мл). Для выражения величины МЕ/мл могут быть использованы и другие математические символы, например, 1. 9*10^5 (1. 9 на 10 в 5 степени).

Показания к исследованию

Основными показаниями к определению вирусной нагрузки при вирусном гепатите С являются:

• лабораторно подтвержденное качественное наличие РНК возбудителя в сыворотке крови;
• наличие у лечащего врача вопросов в выборе схемы применения противовирусных препаратов;
• необходимость в точной оценке эффективности лечения.

Исследование не требует специальной подготовки пациента.

Интерпретация результатов

В норме у здорового человека отсутствует РНК возбудителя, то есть ВН равна нулю. ВН выражается в Международных единицах на мл. Выделяют большую ВН (>400 000 МЕ/мл) и маленькую ВН (< 400 000 МЕ/мл). Расшифровку результата (в зависимости от конкретной тест-системы) можно выразить в следующей таблице:

Для мониторинга эффективности противовирусной терапии следует использовать ПЦР-анализ в режиме реального времени с минимальным уровнем определения 15 МЕ/мл. Для разграничения низкой ВН от высокой используют уровень вирусной РНК 500 000 МЕ/мл.

Контроль уровня вирусной нагрузки проводится как при остром, так и при хроническом гепатите С. Уровень вирусной нагрузки фиксируют во время лечения, по его завершении и через 24 недели после проведенного лечения.

У беременных этот показатель фиксируют с диагностической целью, так как противовирусная терапия при беременности не проводится.

Данные об уровне вирусной нагрузки используются для выбора и контроля противовирусной терапии, но ни в коем случае не дают представление об исходе болезни, особенно в случае хронических форм ВГС с нормальной функцией печени.

При диспансерном наблюдении пациентам один раз в году проводится качественное определение РНК ВГС в крови. Если качественный результат положительный, то далее проводится количественный анализ с определением вирусной нагрузки.

Заключение

На сегодняшний день для диагностики ВГС используется множество различных методов, среди них количественный подсчет уровня вирусной нагрузки является ключевым для успешного лечения пациента. Достоинствами этого метода являются высокая надежность, чувствительность и клиническая специфичность. Кроме того, уровень вирусной нагрузки является очень четким индикатором эффективности лечения противовирусными препаратами как в монотерапии, так и в комбинациях.

[youtube]iaZoaWT_TCM[/youtube]

Но на основании уровня вирусной нагрузки ни в коем случае нельзя судить о течении и исходе болезни. Поэтому данный показатель информативен для лечащего врача лишь в сочетании с другими данными — результатами фибросканирования и биопсии с микроскопией клеток печени. Таким образом, подсчет уровня вирусной нагрузки ни в коем случае не заменяет, а лишь дополняет существующие методы диагностики, используемые в клинической практике.

Уровень вирусной нагрузки — наиболее надежный показатель, позволяющий достоверно установить наличие вируса у пациента и провести контроль терапии.